熒光素標(biāo)記銜接蛋白γ抗體IgG
規(guī)格：100ug和500ug
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（一）酪蛋白的制備取新鮮牛乳100ml，放入250 ml 燒杯中加熱至40℃.加入100ml 加熱至同樣溫度的醋酸緩沖液，一邊加一邊搖動(dòng)，并用pH為4.7（用1%NaOH 或10%醋酸進(jìn)行調(diào)整）。冷卻至室溫，繼續(xù)放置5 分鐘,然后用細(xì)紗布或?yàn)V紙過(guò)濾。濾液為乳清保留以下做鑒定。過(guò)濾所得沉淀物,用少量蒸餾水洗幾次，過(guò)濾。將洗凈的沉淀物懸浮在約30ml 乙醇中，
熒光素標(biāo)記銜接蛋白γ抗體IgG 

用布氏漏斗抽濾。所得沉淀用乙醇和等量混合液洗滌兩次，抽干。zui后用50ml 洗一次并抽干。取出抽干的粉狀物，攤開(kāi)在表面皿上， 使*揮發(fā)。稱(chēng)其干重計(jì)算其產(chǎn)量。
（二）酪蛋白的性質(zhì)鑒定 蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù)論壇
1.溶解度:取試管6 支,分別加水、10%氯化鈉、0.5%氯化鈉，0.1N 氫氧化鈉、0.2%鹽酸及飽和氫氧化鈣溶液各2ml。于每管中加入少量酪蛋白。不斷搖蕩，觀察并記錄各管中的酪蛋白溶解度。
2、米倫反應(yīng)1：取酪蛋白少許，放置于試管中。加入1ml 蒸餾水，再加入米論試劑10 滴，振搖，并徐徐加熱。觀察其顏色變化。
3、含硫（*、半*和蛋氨酸）測(cè)定：取少量酪蛋白溶于1ml0.1N NaOH 溶液中，再加入1-3 滴5%醋酸鉛，加熱煮沸，溶液變?yōu)楹谏?br />（三）乳清中可凝固性蛋白質(zhì)的鑒定將制備酪蛋白時(shí)所得的濾液移入燒杯中，徐徐加熱。即出現(xiàn)蛋白質(zhì)沉淀。此為乳清中的球蛋白和清蛋白。注附：米倫反應(yīng)是由于蛋白質(zhì)分子中有羥基苯基（-CH-OH）存在之故.一些在3.5 位置上沒(méi)有取代基的酚類(lèi)化合物,例如*、酚及廱香酚也呈陽(yáng)性反應(yīng)。在蛋白質(zhì)分子中，只有*才具有羥基苯基，所以蛋白質(zhì)對(duì)米倫試劑起陽(yáng)性反應(yīng)。
1．樣品處理  精密稱(chēng)取0.2～2.0g固體樣品或2～5g半固體樣品或吸取10～20ml液體樣品（約相當(dāng)?shù)?0～40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加人0.2g硫酸銅、3g硫酸鉀及20ml硫酸，稍搖勻后于瓶口放一小漏斗，將瓶以45°角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。小心加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫*停止后，加強(qiáng)火力，并保持瓶?jī)?nèi)液體微沸，至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5h。取下放冷，小心加20ml水。放冷，移人100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容置瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。
 2．按圖⒊1裝好定氮裝量，于水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)裝水至約2／3處，加甲基紅指示液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)的水。
3．向接收瓶?jī)?nèi)加入10m1 2％硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插人液面下，吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應(yīng)室，以10ml水洗滌小玻杯并使其流入反應(yīng)室內(nèi)，塞緊小玻杯的棒狀玻塞。將10m1 40％氫氧化鈉溶液倒人小玻杯，提起玻塞使其緩緩流人反應(yīng)室，立即將玻塞蓋緊，并加水于小玻杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開(kāi)始蒸餾。蒸氣通入反應(yīng)室使氨通過(guò)冷凝管而進(jìn)入接收瓶?jī)?nèi)，蒸餾5min。移動(dòng)接收瓶，使冷凝管下端離開(kāi)液面，再蒸餾1min，然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至灰色或藍(lán)紫色為終點(diǎn)。
同時(shí)吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。
一、原理
蛋白質(zhì)分子中的肽鍵在堿性條件下能與二價(jià)銅離子作用生成紫紅色的絡(luò)合物，產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)的含量成正比，但雙縮脲反應(yīng)并非蛋白質(zhì)*的顏色反應(yīng)，分子中含二個(gè)以上肽鍵者有此反應(yīng)。
二、雙縮脲試劑
未失結(jié)晶水的硫酸銅（CuSO4·5H2O）3.0g溶于500ml新鮮制備的蒸餾水或剛煮沸冷卻的去離子水中，加酒石酸鉀鈉（NaKC4O4O6·4H2O）9.0g，*5.0g，待*溶解后加入6mol/L NaOH溶液100ml，zui后加蒸餾水至1L，置聚乙烯瓶?jī)?nèi)蓋緊保存。
酒石酸鉀鈉的作用是結(jié)合銅離子，維持銅離子在堿性溶液中的溶解度，*防止兩價(jià)銅離子還原。
三、正常參考范圍：60～80g/L
四、臨床意義
（一）血清總蛋白增高
1. 血液濃縮   嚴(yán)重腹瀉 、嘔吐、高燒。
2. 合成增加   主要見(jiàn)于球蛋白合成增加，多發(fā)性骨髓瘤。
（二）血清總蛋白降低
1. 血液稀釋   靜脈滴注過(guò)多低滲溶液，各種原因所引起的水鈉潴留。
2. 攝入不足和消耗增加   營(yíng)養(yǎng)不良，慢性胃腸道疾病引起的消化吸收不良，消耗性疾病，結(jié)核病、甲亢、惡性腫瘤。
3. 合成障礙   嚴(yán)重腫瘤
4. 蛋白質(zhì)丟失   嚴(yán)重?zé)齻?，大量血漿滲出，腎病綜合癥。熒光素標(biāo)記銜接蛋白γ抗體IgG