培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇

2010年09月04日 15:41:36人氣：1237來(lái)源：上海瑞齊生物科技有限公司

細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。

1．凍存細(xì)胞

（1）選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞（證明無(wú)支原體污染），在凍存前1d換液。

（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×10⁷／ml左右密度，離心，去上清。

（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜（DMSO）或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。

（4）分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液。

（5）旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。

（6）凍存：在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。

操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷。

2. 復(fù)蘇細(xì)胞

（1）從罐中取出凍存管。

（2）迅速放入36℃～37℃水浴，不時(shí)搖動(dòng)，使其急速融化，30～60s內(nèi)完成。

（3）凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開(kāi)蓋子，用吸管將細(xì)胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養(yǎng)液。

（4）低速離心（500～1000r／min） 5min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次。

（5）用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng)。

凍存細(xì)胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達(dá)到10⁷／ml，在融后稀釋20倍時(shí)，仍能保持5×10⁵／ml數(shù)量。

關(guān)鍵詞：通用技術(shù)

上一篇：阻燃多股銅芯屏蔽電纜ZR-KVVRP

下一篇：體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟

全年征稿/資訊合作 聯(lián)系郵箱：hbzhan@vip.qq.com

版權(quán)與免責(zé)聲明: 1、凡本網(wǎng)注明"來(lái)源：環(huán)保在線"的所有作品，版權(quán)均屬于環(huán)保在線，轉(zhuǎn)載請(qǐng)必須注明環(huán)保在線，http://www.niunang.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。; 2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容，如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的，一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任，本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。; 3、本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來(lái)源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。; 4、如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。