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使用噬菌體多價(jià)展示還是單價(jià)展示?

2010年10月14日 17:13:35人氣:3430來(lái)源:上海酶聯(lián)生物研究所

使用多價(jià)展示還是單價(jià)展示的選擇與載體類(lèi)型的選擇有關(guān)。帶有噬菌體正常啟動(dòng)子的普通噬菌體載體一般會(huì)形成多價(jià)展示,除非被展示蛋白被大量酶解。另外,用于其中的噬菌粒載體通常仍然會(huì)是多價(jià)展示的,因此pⅧ展示的約2700個(gè)拷貝中只有一小部分是融合蛋白。另一方面,使用能在一個(gè)弱(或非誘導(dǎo)性)啟動(dòng)子的調(diào)控下將蛋白展示在pⅢ蛋白上的噬菌粒載體上,通常會(huì)導(dǎo)致被稱(chēng)為“單價(jià)展示”的結(jié)果。

了解單價(jià)展示的本質(zhì)是很重要的。從含有pⅢ噬菌粒展示載體的并用輔助噬菌體感染過(guò)的大腸桿菌中制備噬菌體顆粒,一個(gè)典型的制備產(chǎn)物會(huì)出現(xiàn)呈泊松分布的融合蛋白的表達(dá):10%或更少的顆粒會(huì)展示一個(gè)拷貝的融合蛋白;展示兩個(gè)拷貝的比例則非常?。欢O碌拇蟛糠诸w粒只會(huì)展示野生型的pⅢ蛋白。所以,大部分展示性種類(lèi)是單價(jià)的,但大部分顆粒*五展示。

由于對(duì)區(qū)別具有不同親和性的結(jié)合物能力的影響,展示的價(jià)位是zui重要的。早期工作顯示,多價(jià)展示會(huì)無(wú)法鑒定出篩選中親和性zui高的克隆,因?yàn)槎鄡r(jià)位會(huì)使弱結(jié)合性克隆具有高表觀親和性(親和力)。單價(jià)展示可以保證基于單純親和性的篩選,因而一毀被用于很多以從文庫(kù)中鑒定出結(jié)合zui緊密的變異體為目的的研究。反過(guò)來(lái),在一些初始候選者的結(jié)合性非常低的應(yīng)用中(如與一個(gè)給定靶標(biāo)結(jié)合的多肽的從頭篩選),多價(jià)位增加了分離出的及弱結(jié)合性的克隆的機(jī)會(huì)。在這樣的項(xiàng)目中,一個(gè)常用的實(shí)驗(yàn)策略就是以多價(jià)展示開(kāi)始,然后當(dāng)被展示多肽的親和性成熟時(shí),轉(zhuǎn)為單價(jià)展示。

大量用于噬菌粒制備的不同輔助噬菌體已經(jīng)被開(kāi)發(fā)出來(lái),并可以從商業(yè)途徑得到。一般而言,它們可以被交替使用。它們?nèi)欢己心芙档桶b效率的突變(以確保噬菌?;蚪M被優(yōu)先包裝),以及含有能保證對(duì)細(xì)菌(含有帶Ff復(fù)制起始位點(diǎn)的噬菌粒)進(jìn)行有效感染的突變M13K07及其衍生物VCSMl3帶有*抗性基因,使得對(duì)被輔助噬菌體感染過(guò)的細(xì)菌抗生素的篩選得以進(jìn)行。

 

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