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細(xì)胞破碎處理方法

2012年11月07日 10:49:11人氣:1049來源:上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司

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【資料簡(jiǎn)介】

細(xì)胞的破碎方法

細(xì)胞的破碎
1、高速組織搗碎將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至zui慢處,開動(dòng)開關(guān)后,逐步加速至所需速度。此法適用于動(dòng)物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。
2、玻璃勻漿器勻漿先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動(dòng),即可將細(xì)胞研碎,此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高,適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
3、超聲波處理法用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂,此法多適用于微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,在1KG至10KG頻率下處理10-15分鐘,此法的缺點(diǎn)是在處理過程會(huì)產(chǎn)生大量的熱,應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施。對(duì)超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用。
4、反復(fù)凍融法將細(xì)胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
5、化學(xué)處理法有些動(dòng)物細(xì)胞,例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞,細(xì)菌細(xì)胞壁較厚,可采用溶菌酶處理效果更好。

  無論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞,都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力,但不是全部,還可通過選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等,使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取
 

 

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