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NCI-H661大細胞肺癌細胞

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所在地上海市

更新時間:2016-06-27 22:35:48瀏覽次數(shù):469次

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NCI-H661大細胞肺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)NCI-H661大細胞肺癌細胞
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。

其他*產(chǎn)品:
Hoechst 33258 赫斯特熒光染料 33258 23491-45-4
Hoechst 33342 赫斯特熒光染料 33342 23491-52-3
Ibutilide FuMarate * 122647-32-9
Ibutilide Related CoMpound B  160087-98-9
ICARITIN 去水淫羊藿黃素 118525-40-9
Idarubicin Hydrochloride 鹽酸依達比星 57852-57-0
Idebenone * 58186-27-9
IKARUGAMYCIN 斑鳩霉素 36531-78-9
HoMoharringtonine * 26833-87-4
英文名稱 中文名稱 CAS號
GLYCIDYL ACRYLATE 丙烯酸-2,3-環(huán)氧丙酯 106-90-1
Glycidyl Azide PolyMer  80044-10-6
GLYCINE, USP (AMINOACETICACID) (90.7 KG)  
Glycine,N-(carboxyMethyl)-N-phenyl- N-苯基亞胺二乙酸 1137-73-1
GlycinecarbonatesodiuMsalt *鈉碳酸鹽 50610-34-9
glycolaldehyde 羥乙醛 141-46-8
Grepafloxacin hydrochloride 鹽酸格帕沙星 161967-81-3
Grubbs Catalyst, 2ndGeneration GRUBB‘S第二代催化劑 246047-72-3
GSK1904529A N-(2,6-二氟苯基)-5-[3-[2-[[5-乙基-2-甲氧基-4-[4-[4-(甲基磺?;?1-哌嗪基]-1-哌啶基]苯基]氨基]-4-嘧啶基]咪唑并[1,2-A]吡啶-2-基]-2-甲氧基苯甲酰胺 1089283-49-7
Guanadrel Sulfate  22195-34-2
Guanidine  113-00-8
GUANIDINOSUCCINIC ACID 2-胍基琥珀酸 6133-30-8
GUANOSINE 3':5'-CYCLIC MONOPHOSPHATE SODIUM SALT 鳥苷-3ˊ,5ˊ-環(huán)磷酸一鈉鹽 40732-48-7
Guanylyl(2' 5')adenosine aMMoniuM salt  103192-47-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則  慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。

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