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蚯蚓溶解酶的凍干技術
2023-6-7 閱讀(913)
蚯蚓纖溶酶具有直接水解纖維蛋白和激活血纖維蛋白溶酶原成血纖維蛋白溶酶，有抗栓和溶栓作用。生物凍干機設備是利用生物真空冷凍干燥技術，進行各種生物制品凍干、人參提取凍干、蛋白酶凍干、益生菌凍干、龜膏凍干、多肽凍干、花青素凍干、蚯蚓纖溶酶凍干等加工生產。其中蚯蚓纖溶酶凍干粉制作工藝是經過一系列的前處理后采用真空冷凍干燥工藝，得到原有營養(yǎng)成分和活性物質的蚯蚓纖溶酶凍干粉。
蚯蚓纖溶酶凍干粉制造工藝具體如下：
1）制作蚯蚓粗粉：將活蚯蚓饑餓自然吐凈泥沙，清洗，風干后低溫粉碎，再進行過篩制成蚯蚓粗粉；
2）制作粗酶溶液：將蚯蚓粗粉用磷酸緩沖液PBS和氯化鈉溶液均勻后置于2~8℃冷柜靜置12小時，在經過離心，得到上清液。再將上清液進行水浴處理后進行第二次離心取上清液，在上清液中加硫酸銨達靜置后進行第三次離心，得到蚯蚓纖溶酶粗酶溶液；
3）粗酶純化和修飾：將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過Sephadex G75凝膠層析，經過沖液洗脫得到蚯蚓纖溶酶純酶。再加入活化的PEG修飾劑和硼酸緩沖液，進行保溫反應，在經過磷酸緩沖液透析和離心進行上清液純化，收集活性成分得到蚯蚓纖溶酶修飾酶；
4）蚯蚓纖溶酶冷凍干燥：將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝盤，料厚8mm左右，進行-45℃低溫冷凍300min，而后在35pa真空下，進行一次干燥控溫范圍-30~10℃，升華干燥時間720min,除去大部分流離水，然后進行解析干燥控溫范圍10~40℃，干燥運行時間860min。經中生物凍干機的終點判斷確定，凍干結束得到含水1%以內的蚯蚓纖溶酶凍干粉。
